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    多肽合成文章1

    多肽合成文章1

    * 来源 : * 作者 : admin * 发表时间 : 2016-11-24 * 浏览 : 71

    多肽合成步骤(合成左边含有-Ac,右边含有-NH2的多肽)

    (1) 将筛板放到注射器中并对注射器编号,向注射器中加入5 mL DMF振荡清洗3分钟,然后抽滤,重复3次;再加入5mL DCM,振荡清洗3分钟,抽滤,重复3次;

    (2) 称取氨树脂125mg,倒入注射器中,向注射器内加入DCM(使DCM与树脂的体积为11,放到摇床中振荡2h,然后抽干)目的是活化树脂使其溶胀。

    (3) 脱帽,向注射器中加入20% 的哌啶(溶于DMF中,即体积比为2080=哌啶:DMF)(至刻度线3.5mL)振荡,抽滤,时间5min5min15min(这期间称取第一个氨基酸)

    (4) 脱帽结束后,抽滤,向注射器中加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤,再向注射器中DCM(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤;

    (5) 抽滤后用针头挑取少量脱 Fmoc 后的树脂加入试管(小试管)此时显色为蓝绿色或黑色;(使Fmoc保护的NH2中的Fmoc脱去,使树脂上的氨基与氨基酸的羧基反应)向其中加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,抽滤。

    (3) 称取Fmoc 保护的氨基酸4倍量,eg: M(Fmoc-氨基酸)*4*0.1mmol=() mg,向其中加入 4 倍量的活化剂(最好现配现用,一般放置1-2天,变成红色后最好不要用)(1.3mL),使氨基酸充分溶解10min后,加入 6倍量的DIEA(105μL),充分摇匀,10min后,将其倒入注射器中(剩余用最少量DMF洗涤,倒入注射器),振荡反应3h

    (4) 反应完成后抽滤,向注射器加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤,再向注射器中DCM(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复2次,每次抽滤;

    (5) 抽滤后用针头挑取少量树脂显色,此时显色为无色(若这时不继续加氨基酸,就把其注射器完全抽干,若发现不能完全抽干,再倒入DCM抽干,待第二天继续脱帽加氨基酸。注意:是完全抽干像粉末状,易于保存,放于N2保护的干燥器中);然后向注射器加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,抽滤;

    (6) 脱帽,向注射器中加入20% 的哌啶(溶于DMF中,即体积比为2080=哌啶:DMF)(至刻度线3.5mL)振荡,抽滤,时间5min5min15min(这期间称取下一个氨基酸以备加下一个氨基酸时用)

    (7) 脱帽结束后,抽滤,向注射器中加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤,再向注射器中DCM(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤;

    (8) 抽滤后用针头挑取少量脱 Fmoc 后的树脂加入试管(小试管)此时显色为蓝绿色或黑色;

    重复步骤(3)-(8)直至最后一个氨基酸反应完.

    (9)加入3.5mL 20%—25%乙酸酐溶液(即体积比为2080=乙酸酐:DMF)反应30min完成后抽滤 (即最后一个氨基酸与其反应生成-Ac),向注射器加入DMF(至刻度线3.5mL)振荡3分钟,重复3次,每次抽滤,再向注射器中DCM振荡3分钟,重复3次,每次抽滤,抽滤后用针头挑取少量脱 Fmoc 后的树脂加入试管(小试管)此时显色为无色(表明最后一个氨基酸被-Ac保护);最后DCM和甲醇(至刻度线3.5mL)交替振荡3分钟,重复3次,每次抽滤;最后为DCM洗涤抽滤。

    (10) 切割。完全抽干像粉末状后,将切割液(3.5mL)倒入注射器中振荡切割2.5h,然后将反应液注射到冰乙醚(20-30mL),再将剩余的切割液(1.5mL)倒入注射器中振荡0.5h后将反应液注射到冰乙醚中,配平,低温离心5000-10000rpm, 20min,倒掉上清液,重复用冰乙醚洗涤离心3次,倒掉上清,将装有样品的离心管放到通风橱中使其干燥,取少量样品测质谱。